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通過抑制核酸合成中的酶或作為偽底物摻人核酸(DNA、RNA)，從而影響核酸的功能。根據其干擾核酸合成的環節不同，可進一步分為：
(1)嘌呤核苷酸合成抑制劑，如巰嘌呤等。
(2)胸苷酸合成酶抑制劑，如氟尿嘧啶等。
(3)二氫葉酸還原酶抑制劑，如甲氨蝶呤等。
(4)核苷酸還原酶抑制劑，如羥基脲等。
(5)DNA多聚酶抑制劑，如阿糖胞苷等。
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